martes, 2 de noviembre de 2010

PRÁCTICA 6 Verificación de la calibración del espectrofotómetro

RESULTADO DE APRENDIZAJE PROPUESTO.

Verifica la calibración del espectrofotómetro de acuerdo a la normatividad vigente

INTRODUCCIÓN.

Existen en la naturaleza direfentes tipos de radiaciones electromagnéticas como: rayos cósmicos, gama, X, radiación visible, ultravioleta, infrarroja, etc. El ordenamiento secuencial de estas formas de radiación se conoce como espectro electromagnético.

RAYOS CÓSMICOS
RAYOS
GAMA

RAYOS
   X
ULTRAVIOLETA
VISIBLE
INFRARROJO
MICROONDAS
ONDAS
DE
RADIO

VIOLETA
380–450 nm
AZUL
450–495 nm
VERDE
495–570 nm
AMARILLO
570–590 nm
NARANJA
590–620 nm
ROJO
620–750 nm


ESPECTRO VISIBLE.

Las radiaciones electromagnéticas se propagan describiendo ondas y al a distancia que hay entre las crestas o valles de dos ondas adyacentes, medidas a lo largo de la línea de propagación, se llama longitud de onda y se presenta con la letra A (lambda).

UNIDADES DE LA LONGITUD DE ONDA
DENOMINACIÓN
SIMBOLO
EQUIVALENCIA
Centímetro
cm.
1x10-2 m
Micrómetro
M
1X10-6 M
Milimicra
mM
1x10-9 m
Nanómetro
Nm
1x10-9 m
Angstrom
A
1x10-10m



Se le llama espectro visible, al conjunto de colores que van superpuestos que van desde el violeta hasta el rojo, y esta gama de colores del arco iris recibe el nombre de espectro visible.
Por encima de la frecuencia de las radiaciones infrarrojas se encuentra lo que comúnmente es llamado luz, un tipo especial de radiación electromagnética que tiene una longitud de onda en el intervalo de 0,4 a 0,8 micrómetros. La unidad usual para expresar las longitudes de onda es el Angstrom. Los intervalos van desde los 8.000 Å(rojo) hasta los 4.000 Å (violeta), donde la onda más corta es la del color violeta.
En un laboratorio de análisis clínicos los analitos se pueden determinar por las técnicas espectrofotométricas su concentración en los fluidos corporales, por lo tanto su determinación se realiza por las siguientes metodologías.
.- Curva e calibración
.-Método directo
.- Método del factor.
Se debe considerar algunas medidas que son importantes para la buena aplicación de las técnicas espectrofotométricas, como son:
.-Preparación de soluciones estándar
.-Selección de longitud de onda
.-Elaboración de la curva estándar de calibración
.-Determinación de las concentraciones de las soluciones problema.

SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA.
Para seleccionar la longitud de onda que nos permita obtener lecturas de absorbancia que tengan una alta sensibilidad analítica, se requiere elegir dentro del rango de longitudes de onda que comprenden el espectro visible o ultravioleta, aquella dónde se tiene un máximo de absorbancia para cada solución en estudio; lo cual se obtiene efectuando un espectro de absorbancia.

MÉTODO GRAFICO.

(Elaboración de la curva estándar de calibración)
La elaboración de una curva de calibración tiene por objeto la determinación cuantitativa de la concentración de soluciones problema; pero además, se puede evaluar el funcionamiento del espectrofotómetro a través de la linealidad fotométrica, se determina también hasta que rango de concentración, para cada solución en particular, es valida la ley de LAMBERT BOUGER BEER.


(Determinación de la concentración de soluciones problema)
Para la determinación de la concentración de una solución problema, la lectura de la muestra se mide en las mismas condiciones que las soluciones estándar.
Con la lectura obtenida se procede a localizar dicho valor en la escala de absorbancia en el eje de las ordenadas.

En este punto se traza una línea recta perpendicular al eje de lar ordenadas y en el punto de intersección con la curva de calibración se traza una línea perpendicular hasta la intersección con el eje de las abscisas, ósea, la escala de concentración cuyo valor corresponderá a la concentración problema. Esta operación se conoce como interpolación en la curva de calibración para obtener la concentración.

Cuando el valor de la lectura de la solución problema no esta comprendido entre los limites de la curva de calibración, se le hará una dilución.

Este método se utiliza cuando tenemos un mínimo de 3 estándares y necesitamos trabajar un número muy amplio de soluciones problema.

MÉTODO DEL CÁLCULO DIRECTO

Consiste en obtener la concentración de la solución problema por medio de a aplicación de la fórmula:

Cst

            Cp=-------x  Lp
                    Lst

Cp: Concentración de la solución problema
Cst: Concentración de la solución estándar
Lst: Lectura en absorbancia del estándar
Lp: Lectura en absorbancia del problema
MÉTODO DEL FACTOR

Cuando tenemos un estándar y varios problemas por determinarles su concentración, la fórmula del método anterior se convierte en:

Cp= F x Lp                                                

MÉTODO DIRECTO

Este método se realiza en los espectrofotómetros que tienen la función de concentración, donde se calibra a la concentración estándar, ahora se sustituye por el problema y nos da automáticamente la lectura de concentración del problema.


Dentro de los espectrofotómetros tenemos los siguientes:

ESPECTROFOTÓMETRO DE LUZ VISIBLE

SPECTRONIC 20
(Baush and Lomb)


TÉCNICA DE CALIBRACIÓN DEL ESPECTROFOTOMETRO SPECTRONIC 20
1. Conecte y encienda la especificación 20.
2. Ajuste el instrumento a la longitud de onda adecuada con el mando situado en la superficie de la mano derecha del espectrofotómetro.
3.- Encender aparato
4.- Se debe calentar durante 30 minutos antes de su uso.
5.- Con el mismo boon de encendido o de calibración al aire lleve la aguja de la escala al valor de 0% T
6.- Llene una celda en el compartimento de muestra
7.- Introduzca la celda en el compartimento de muestra
8.- Ajuste a 100% de T o a 0 de A con le boton de la izquierda.


Realización de Medidas Con El Spectronic 20

 
1. Calibrar El Instrumento (v. Las indicaciones de arriba) en la Longitud de Onda Que se desea Medir. Que va utilizar un EL DISOLVENTE de la Solución de la Muestra de como Referencia (lo Cual suele servicios de agua).
 
2.
Una Cubeta limpiarse 3 / we de Solución de la Muestra 4.
 
3.
Colque La Cubeta de la Muestra en El portamuestras y CIERRE La Cubierta.
 
4.
lea la transmitancia o absorbancia Por Ciento, necesario segun el mar.
 
Un Diagrama Esquemático de las Naciones Unidas Spectronic 20 sí Muestra un siguiente.





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